সিকোয়েন্সিংয়ের আগে কেন পিসিআর পণ্যগুলিকে বিশুদ্ধ করা প্রয়োজন?
সিকোয়েন্সিংয়ের আগে কেন পিসিআর পণ্যগুলিকে বিশুদ্ধ করা প্রয়োজন?
Anonim

কাঙ্খিত যাচাই পণ্য হয় অপরিহার্য , যার মধ্যে অ-নির্দিষ্টের অভাব নিশ্চিত করা অন্তর্ভুক্ত পণ্য এবং প্রাইমার ডাইমার। পরিষ্কার -আপ বিক্রিয়া মিশ্রণও হয় প্রয়োজনীয় অসংগঠিত প্রাইমার এবং ডিএনটিপিগুলি অপসারণ করতে যা পরবর্তী প্রতিক্রিয়াগুলিতে হস্তক্ষেপ করতে পারে এবং একটি অপাঠ্য অনুক্রমের দিকে নিয়ে যেতে পারে।

এছাড়া পিসিআর পণ্য বিশুদ্ধ করার প্রয়োজন কেন?

তোমার দরকার পিসিআর পণ্য শুদ্ধ করুন অব্যবহৃত প্রাইমার, নিউক্লিওটাইড এবং এনজাইম থেকে পরিত্রাণ পেতে লাইগেশনের সাফল্য অপ্টিমাইজ করার জন্য, যা রক্ষণাবেক্ষণ এবং ক্রমানুসারে পণ্য এর পিসিআর . প্রতি শুদ্ধ করা দ্য পিসিআর পণ্য , আকার বর্জন ক্রোমাটোগ্রাফি ব্যবহার করা হয়.

কেউ জিজ্ঞাসা করতে পারে, এন্ডোনিউক্লিজ হজমের সীমাবদ্ধতার আগে আপনার কি পিসিআর পণ্যগুলিকে বিশুদ্ধ করা উচিত? সংখ্যাগরিষ্ঠ সীমাবদ্ধতা এনজাইম সক্রিয় আছে পিসিআর বাফার ক্লোনিং অ্যাপ্লিকেশনের জন্য, পরিশোধন এর পিসিআর পণ্য হজমের আগে হয় প্রয়োজনীয় সক্রিয় থার্মোফিলিক ডিএনএ পলিমারেজ অপসারণ করতে পিসিআর মিশ্রণ ডিএনএ পলিমারেজগুলি ক্লিভড ডিএনএ-এর প্রান্তগুলিকে পরিবর্তন করতে পারে এবং বন্ধনের ফলন হ্রাস করতে পারে।

লোকেরা আরও জিজ্ঞাসা করে, আপনি কীভাবে সিকোয়েন্সিংয়ের জন্য পিসিআর পণ্যগুলি প্রস্তুত করবেন?

পিসিআর পণ্যের সরাসরি সিকোয়েন্সিং

  1. নিশ্চিত করুন যে আপনি সঠিক খণ্ডটি পরিবর্ধিত করেছেন।
  2. আপনাকে অবশ্যই সমস্ত অবশিষ্ট PCR প্রাইমার এবং অসংগঠিত নিউক্লিওটাইডগুলি সরিয়ে ফেলতে হবে।
  3. যদি PCR প্রাইমারগুলিও সিকোয়েন্সিং প্রাইমার(গুলি) হয় তবে নিশ্চিত করুন যে সেগুলি আমাদের শর্তের সাথে মেলে৷
  4. নমুনা অতিরিক্ত মনোনিবেশ করবেন না!

আপনি PCR পণ্য ক্রম করতে পারেন?

সরাসরি সিকোয়েন্সিং এর পিসিআর পণ্য . সিকোয়েন্সিং শুধুমাত্র ব্যবহার করে এক প্রাইমার দুটির পরিবর্তে ব্যবহৃত হয় পিসিআর . যদি তুমি করো উভয় প্রাইমার অপসারণ করবেন না, আপনি হবে দুই পেতে ক্রম পঠনযোগ্য নয় যে একে অপরের উপর superimposed. একটি ব্যবহার করা ঠিক আছে পিসিআর জন্য প্রাইমার সিকোয়েন্সিং যতক্ষণ না এটি আমাদের শর্তের সাথে মেলে।

প্রস্তাবিত: